自体血清培养新西兰大白兔关节软骨细胞 - 杨明吾; 闫虎; 李志峰 (临床与病理杂志, 2016)
目的：改进与探讨新西兰大白兔软骨细胞体外培养的方法。方法：取3月龄新西兰大白兔自体血，制备自体血清备用，无菌条件下取4周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨，采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法，分离关节软骨细胞并应用新西兰大白兔自体血清进行原代、传代培养；采用形态学观察，甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对膝关节软骨细胞进行鉴定，MTT法检测软骨细胞的增值能力；结果：倒置显微镜下见原代软骨细胞2 h后开始贴壁，8 h可形成单层，24 h即可传代。第1~5代细胞表型稳定，增殖力良好。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞核呈深染色，细胞质呈淡蓝色；免疫组织化学显示软骨细胞Ⅱ型胶原呈黄褐色表达，MTT检测显示前5代软骨细胞增值能力强，无明显差异；结论：结果表明自体血培养的前5代新西兰大白兔节软骨细胞均可用于膝骨关节炎的研究。