全面分子筛选：从RT-PCR 到RNA 测序 - Carlota Costa; Ana Giménez-Capitán; Niki Karachaliou; Rafael Rosell (临床与病理杂志, 2015)
到目前为止，对肿瘤和非肿瘤中mRNA表达的分析主要是通过RT-PCR方法。认为它是测定特定靶 基因的拷贝数的金标准。RT-PCR的应用提示RNA转录水平可以辅助对各种疾病患者进行分类和预 测其预后，这为一些重要的临床试验提供了依据。然而，定量PCR数据质量的固有变异性使其很 难重复，并且分析某个基因需要在实验室耗费大量时间。此外，比较基因在不同的实验中的表达 水平往往很困难，并且需要复杂的标准化方法。多年来，许多已开发的技术均未能很好地应用于 临床。RNA测序是一个新的、简单而有效的用来测定转录组的构成及发现新的外显子或基因的方 法。该技术的优点是可重复性高，测序范围广，对RNA样本量的要求低，即使没有基因组测序也 能够检测新的转录和剪接。然而，这种RNA测序技术不可能取代目前的RT-PCR方法，但能够根据 需求及医院和实验室的资源与其互补。先以RNA测序确定出部分基因，再利用RT-PCR方法进行进 一步的检测。这两个互补的技术能够识别肿瘤所有的分子特征，若作为常规分析应用于癌症实验 室，将有助于对病人的分类，同时可以协助肿瘤学家做出临床决策。