小鼠子宫珠蛋白结合蛋白真核表达载体构建及其在COS-1细胞的表达 - 李晨; 史小娟; 黄艳红; 冯丹丹; 罗自强 (临床与病理杂志; 卷 33, 编号 1 (2 2013), 2014)
构建小鼠子宫珠蛋白结合蛋白(mouse uteroglobin binding protein, mUGBP)真核表达载体,观察其在COS-1细胞中的表达和定位。方法: 用RT-PCR方法扩增mUGBP的cDNA序列,将其插入pEGFP-N1载体的多克隆位点构建pEGFP-UGBP重组质粒。采用脂质体转染法将重组质粒转染到无内源性mUGBP表达的非洲绿猴肾成纤维细胞株COS-1中,观察其在细胞内的表达,并用Western免疫印迹方法进行验证。结果: pEGFP-UGBP重组质粒经酶切鉴定以及测序证实,插入的目的基因序列完全正确。激光共聚焦显微镜观察发现,转染了pEGFP-UGBP重组质粒的细胞株可见绿色萤光蛋白的表达;Western免疫印迹检测发现细胞膜组分中可检获上述转染了重组质粒的细胞所表达的融合蛋白。结论: 成功构建了pEGFP-UGBP重组质粒并进行了真核表达。