MiR-23b通过调节TGF-β1/SMAD3信号通路对博莱霉素所致大鼠肺纤维化及自噬水平的影响 - 谢健龙; 区泳芳; 陈永华; 常岸芷; 缪辉来 (临床与病理杂志, 2021)
目的：探究miR-23b通过调节转化生长因子-β1(transforming growth factor β，TGF-β1)/SMAD同源物3(mothers against decapentaplegic homolog 3，SMAD3)信号通路对博莱霉素(bleomycin，BLM)所致大鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis，PF)及自噬水平的影响。方法：采用BLM诱导大鼠PF模型，并分为对照组、PF组、agomiR-阴性对照(negative control，NC)组和agomiR-23b组。通过生物信息学预测及双荧光素酶实验验证miR-23b对SMAD3的调控作用；用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin stain，HE)和Masson染色观察大鼠肺组织病理学改变，免疫组织化学染色观察大鼠肺组织I型胶原蛋白(collagen-I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、酵母自噬相关基因6 (autophagy related protein 6，ATG6)的哺乳动物同源体(beclin-1)、轻链3-II (light chain 3-II，LC3-II)的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)检测肺组织中miR-23b和SMAD3 mRNA的表达，蛋白质印迹法检测肺组织中TGF-β1、SMAD3和SMAD7的蛋白质表达。将人肺成纤维细胞(HFL1)分为对照组、PF组、agomiR-NC组和agomiR-23b组；用RT-qPCR检测各组细胞中miR-23b和SMAD3 mRNA的表达，Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭能力，透射电镜观察各组细胞自噬泡的形成。结果：与对照组相比，PF组和agomiR-NC组PF程度更严重；肺组织SMAD3 mRNA以及collagen-I、α-SMA、TGF-β1和SMAD3蛋白表达水平明显升高，miR-23b以及beclin-1、LC3-II和SMAD7蛋白表达水平明显降低；HFL1细胞SMAD3 mRNA表达水平以及迁移和侵袭能力提高，自噬活性降低(均P<0.05)。与PF组相比，agomiR-23b组大鼠PF程度得到有效改善；肺组织collagen-I、α-SMA、TGF-β1和SMAD3蛋白表达水平明显降低，beclin-1、LC3-II和SMAD7蛋白表达水平明显升高；HFL1细胞迁移、侵袭能力降低，自噬活性增强(P<0.05)。结论：MiR-23b通过靶向抑制SMAD3的表达抑制肺成纤维细胞的迁移，降低PF程度，并提高自噬活性；其机制可能与调控TGF-β1/SMAD3通路有关。