沉默E2F1对高糖诱导视网膜神经节细胞的保护作用 - 雷永华; 刘俊保; 徐蓉娟; 李红; 郑志攀; 陈原邻; 杨明 (临床与病理杂志, 2021)
目的：探讨E2F1对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)存活和凋亡的影响及其作用机制。方法：以RGC-5细胞为研究对象，构建高糖损伤模型，将RGC-5细胞转染后分为空白对照组、高糖组、高糖+si-E2F1组、高糖+si-con组、高糖+si-E2F1+PBS组、高糖+si-E2F1+SD19组。分别采用实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR)与蛋白质印迹法检测细胞中E2F1 mRNA表达；四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)检测细胞存活率，TUNEL法和流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测细胞凋亡。蛋白质印迹法检测细胞中E2F1、磷酸化的转录激活子3(p-signal transducer and activator of transcription 3，p-STAT3)、STAT3、磷酸化的Janus蛋白酪氨酸激酶2(p-Janus kinase 2，p-JAK2)、JAK2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)和活化的多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(cleaved poly-ADP-ribose polymerase，cleaved PARP)蛋白表达。结果：与空白对照组相比，高糖组RGC-5细胞中E2F1表达水平升高，细胞存活率明显下降，p-STAT3、p-JAK2、cleaved caspase-3、cleaved PARP、E2F1表达及细胞凋亡率显著升高；沉默E2F1表达后，细胞存活率明显升高，而cleaved caspase-3蛋白和cleaved PARP蛋白表达及细胞凋亡率降低。SD19可部分逆转沉默E2F1对RGC-5细胞的保护作用。结论：抑制E2F1表达能够减轻高糖诱导的RGCs凋亡，其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。