MiRNA-326抑制人椎间盘退变髓核细胞活力和凋亡的机制 - 高笛; 刘殿鹏 (临床与病理杂志, 2020)
目的：探讨过表达miRNA-326对椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)髓核(nucleus pulposus，NP)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：构建miRNA-326慢病毒表达载体，在293T细胞中获得重组慢病毒，经感染NP细胞得到稳定过表达细胞系GV369-miRNA-326-NP，同时设置空载体GV369-NP组与空白组。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)]的表达，实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)方法检测miRNA-326的表达，流式细胞术检测细胞凋亡，荧光素酶报告基因分析验证miRNA-326与FasL的靶向关系，蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白FADD，caspase-3，Bcl-2及Bax的表达，使用试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果：荧光显微镜下示，经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光，而空白组未见绿色荧光。与空白组相比，GV369-miRNA-326-NP组中miRNA-326的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高，而细胞凋亡率，FADD，caspase-3和Bax的表达水平明显下降，差异均有统计学意义(P 0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miRNA-326与FasL存在靶向关系。结论：MiRNA-326可抑制IDD NP细胞发生凋亡，既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡，也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。