MiR-101靶向调控CREB1抑制肺癌的发展 - 李慧敏; 姜东亮; 张韧; 王妮妮 (临床与病理杂志, 2019)
目的：观察miR-101在肺癌细胞或组织中的表达变化情况，分析miR-101通过靶向调控环磷腺苷反应元件结合蛋白1(cyclic adenosine monophosphate responsive element binding protein 1，CREB1)对肺癌发生发展的影响。方法：实时聚合酶链反应检测肺癌组织，癌旁正常组织，直径≤5 cm，>5 cm，转移，无转移肺癌组织中的miR-101表达量以及各株肺癌细胞中miR-101与mRNA的表达量。MicroRNA靶基因数据库与荧光素酶报告基因检验CREB1为miR-101的潜在靶基因。实时聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测miR-101 mimics对CREB1 mRNA及蛋白表达的影响。实时聚合酶链反应检测肿瘤组织与癌旁正常组织CREB1 mRNA的表达量；免疫组织化学检测肿瘤组织和癌旁正常组织中CREB1的表达量。CCK-8检测各转染组的光密度(optical density，OD)值；流式细胞术检测细胞比值。Tranwell迁移实验和细胞划痕实验检测细胞迁移能力。观察21 d裸鼠肿瘤体积及质量；检测miR-101在miR-101 mimics转染组裸鼠肿瘤组织中的表达量；增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)染色检测裸鼠肿瘤细胞增殖情况。结果：与癌旁正常组织相比，肺癌组织中miR-101的表达量显著降低；转移的肺癌组织中miR-101的表达量显著低于无转移肿瘤组织；直径≤5 cm的肿瘤中miR-101的表达量显著高于直径>5 cm的肿瘤；各株肺癌细胞的miR-101表达量均显著低于正常肺细胞，而CREB1 mRNA表达量相反。miR-101可通过结合CREB1的3'-非翻译区(3'-untranslated region，3'-UTR)抑制CREB1的表达。miR-101能够抑制CREB1的mRNA翻译及其蛋白表达。肺癌组织中CREB1 mRNA表达量显著升高。miR-101可抑制肺癌细胞A549的增殖，迁移并使其细胞周期在S期聚集，CREB1补回该抑制作用。miR-101 mimics转染组裸鼠肿瘤体积及质量均显著低于对照组；miR-101过表达能够抑制A549细胞的增殖，抑制肿瘤发展。结论：miR-101通过抑制CREB1表达抑制肺癌的发展，可能成为肺癌诊断及治疗的新靶标。